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本實驗依據(jù)GB 31658.17-2021《動物性食品中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，使用PolyPlus HLB-2小柱在ASPE480免疫親和固相萃取系統(tǒng)上運行凈化方法，結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）進(jìn)行了豬肉中多獸殘的檢測。

結(jié)果表明，在50 μg/kg的四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物，經(jīng)過Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液、磷酸鹽緩沖溶液提取，使用PolyPlus HLB-2小柱凈化后，ASPE480儀器上運行凈化方法多獸殘的回收率均在60% ~ 110%。

實驗部分

儀器、試劑與材料

主要儀器設(shè)備：

美正生物ASPE480免疫親和固相萃取系統(tǒng)、PerkinElmer?QSight液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀。

試劑材料：

甲醇、乙腈、乙酸乙酯、甲酸為色譜純；

乙二胺四乙酸二鈉·二水、檸檬酸·一水、磷酸氫二鈉·十二水、磷酸二氫鈉·二水、濃氨水、氫氧化鈉為分析純；

甲醇中32種磺胺類/喹諾酮類化合物混標(biāo)，P/N：MSVL0415-100M；

四環(huán)素類混合標(biāo)準(zhǔn)品，P/N：MSVL0399-100M。

0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液：取磷酸二氫鈉·二水7.8 g，用水溶解并稀釋至1000 mL。

0.05 mol/L磷酸氫二鈉溶液：取磷酸氫二鈉·十二水17.9 g，用水溶解并稀釋至1000 mL。

磷酸鹽緩沖液：取0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液190 mL，用0.05 mol/L磷酸氫二鈉溶液稀釋至1000 mL。

1 mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4 g，用水溶解并稀釋至100 mL。

Mcllvaine-Na2EDTA緩沖溶液：取檸檬酸·一水12.9 g、磷酸氫二鈉·十二水10.9 g、乙二胺四乙酸二鈉·二水39.2 g，加水900 mL，用1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至5.0?±?0.2，用水稀釋至1000 mL。

20%甲醇溶液：取甲醇20 mL，加水80 mL，混勻。

洗脫液：取甲醇150?mL，加乙酸乙酯150?mL、濃氨水6?mL，混勻。

復(fù)溶液：取水40 mL，加甲醇5 mL、乙腈5 mL、甲酸0.05 mL，混勻。

PolyPlus HLB-2小柱：200 mg/6 mL，P/N：CSS0147。

樣品制備

樣品提取

稱取試樣2 g，加Mcllvaine-Na2EDTA緩沖液16 mL，渦旋1 min，超聲20 min，－2℃、10000 r/min離心5 min，收集上清液。殘渣中加磷酸鹽緩沖液16 mL，重復(fù)提取1次，合并2次提取液，混勻，－2℃、10000 r/min離心5 min，玻璃纖維濾紙過濾，取25mL濾液，備用。

樣品凈化

在ASPE480儀器上，編輯運行方法進(jìn)行固相萃取小柱的凈化；收集洗脫液，45℃水浴氮氣緩慢吹干。具體方法如下：

圖1. ASPE480儀器凈化方法

基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制

取高濃度獸藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用空白樣品基質(zhì)溶液稀釋成50 ng/mL的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

色譜條件

色譜柱：Kinetex F5，2.6 μm，3.0 × 50 mm ；

流動相：A 相- 2 mM醋酸銨（含0.1%甲酸），B 相-甲醇；

柱??溫：35℃；

進(jìn)樣量：5 μL；

梯度洗脫見下表。

液相色譜梯度洗脫條件

質(zhì)譜條件

離子源：ESI+；霧化氣溫度：220℃；電噴霧電壓：4800 V；離子源溫度：300℃；反吹氣溫度：100℃； 質(zhì)譜接口溫度：250℃；采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。

32種多獸殘質(zhì)譜參數(shù)

注：本實驗中所有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)都以第一組離子對作為定量離子對。

實驗結(jié)果

ASPE480儀器檢測豬肉加標(biāo)回收實驗結(jié)果（添加水平50 μg/kg，n = 3）

實驗譜圖

50?ng/mL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液色譜圖

50?ng/mL豬肉基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液色譜圖

豬肉基質(zhì)空白色譜圖

50?μg/kg豬肉基質(zhì)加標(biāo)色譜圖

結(jié)論

本實驗使用ASPE480免疫親和固相萃取系統(tǒng)編輯SPE凈化方法，通過PolyPlus HLB-2小柱結(jié)合LC-MS/MS的方法對添加水平為50 μg/kg的豬肉樣品進(jìn)行了檢測。結(jié)果表明，通過使用PolyPlus HLB-2小柱結(jié)合ASPE480免疫親和固相萃取系統(tǒng)對豬肉進(jìn)行凈化，32種獸藥回收率滿足要求且變異系數(shù)小于10%。

附相關(guān)產(chǎn)品? ? ? ??