2022-06-24 13:23瀏覽量:470
近期,有不少使用PCR技術(shù)的用戶向我們咨詢CMA、CNAS擴(kuò)項(xiàng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的要求,以及分子實(shí)驗(yàn)室常見的污染源及控制措施。接下來(lái)我們將匯總的問(wèn)題一一跟大家解答分享。
1、分子實(shí)驗(yàn)室布局可參考的標(biāo)準(zhǔn)有哪些?
分子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)可參考的有以下文件:
(1)衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào)1附件:醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則。
(2)GB/T27403-2008 《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品分子生物學(xué)檢測(cè)》。
(3)GB 19489-2008《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》。
(4)WS233-2017 《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》。
(5)CNAS-GL42:2016《基因擴(kuò)增領(lǐng)域檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可指南》。
2、分子實(shí)驗(yàn)室的幾個(gè)區(qū)可以合并嗎?
根據(jù)衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào) -臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)計(jì)原則。原則上臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域:試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。?這4個(gè)區(qū)域在物理空間上必須是完全相互獨(dú)立的?!杜R床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)計(jì)原則》中提到,可根據(jù)使用儀器的功能,區(qū)域可適當(dāng)合并。
例如當(dāng)使用實(shí)時(shí)熒光PCR儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí),擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并為一個(gè)區(qū);采用樣本處理、核酸提取及擴(kuò)增檢測(cè)為一體的自動(dòng)化分析儀,則標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。
3、PCR操作中常見的污染有哪些?
污染原因/特點(diǎn)及防控措施
?PCR操作中常見的污染有PCR產(chǎn)物污染、樣品污染、耗材污染、氣溶膠污染等,具體介紹如下:
(1)PCR產(chǎn)物造成污染,拷貝量大、數(shù)量多,發(fā)生在儀器處,容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。需要盡量避免在PCR反應(yīng)室開啟產(chǎn)物蓋子、PCR產(chǎn)物反應(yīng)后立即處理、定期擦洗儀器。
(2)樣品污染,由于樣品本身存放、制樣容器、提取過(guò)程交叉污染造成。建議制樣過(guò)程把控、制樣容器用3%過(guò)氧化氫浸泡、超聲清洗。
(3)移液器污染,引發(fā)原因有:反復(fù)用力吸打、沒有定期擦洗檢修移液器、連續(xù)操作大量樣本、吹吸高濃度陽(yáng)性對(duì)照。建議制樣過(guò)程把控、制樣容器3%過(guò)氧化氫浸泡、超聲清洗、操作連續(xù)大量樣本時(shí)用過(guò)濾吸頭。
(4)氣溶膠污染,由于劇烈震動(dòng)反應(yīng)管、突然開蓋、反復(fù)吹吸引起,大力吸樣一個(gè)氣溶膠顆??蓴y帶48000個(gè)拷貝。建議震蕩后短暫離心再開蓋、避免反復(fù)吹吸、連續(xù)大量樣本時(shí)用過(guò)濾吸頭。
4、PCR操作全過(guò)程的污染防控原則和措施介紹
(1)合理的實(shí)驗(yàn)室分區(qū),試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū),樣品制備及體系配制區(qū),擴(kuò)增區(qū),擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
(2)PCR試劑應(yīng)在裝有紫外燈的超凈工作臺(tái)或負(fù)壓工作臺(tái)中配制和分裝存儲(chǔ),分裝應(yīng)標(biāo)明時(shí)間、種類和編號(hào)。
(3)實(shí)驗(yàn)后清潔,實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面、離心機(jī)、移液槍用10%次氯酸鈉消毒,桌椅用75%乙醇擦拭,定期打開紫外燈對(duì)空氣進(jìn)行消毒。
大家如果還有關(guān)于微生物檢驗(yàn)相關(guān)的問(wèn)題可以留言給我們,我們會(huì)請(qǐng)教專家或我們研發(fā)老師,之后分享答案哈。